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1.
Diaeta (B. Aires) ; 34(157): 14-19, 20160000.
Artigo em Espanhol | LILACS | ID: biblio-953055

RESUMO

Introducción: Existen controversias sobre el comportamiento del gasto energético en reposo (GER) en pacientes en hemodiálisis (HD), algunos autores señalan que la HD aumenta el GER, mientras que otros no hallaron diferencias significativas. Objetivos: Determinar si el GER en pacientes en HD es superior al de individuos que no dializan. Determinar si el GER en pacientes en HD es mayor durante el momento de diálisis en comparación al momento que no dializan. Materiales y método: Para el objetivo 1, diseño comparativo a muestras independientes, observacional, prospectivo, transversal; para el objetivo 2, comparativo a muestras relacionadas, observacional, prospectivo, longitudinal. La muestra quedó conformada por 30 individuos en HD crónica y 30 controles apareados por edad, sexo, actividad física y estado nutricional. Se midió el GER utilizando un calorímetro indirecto móvil. Para el análisis estadístico se aplicaron test de diferencias (p < 0,05). Resultados: El GER de los individuos en HD no fue significativamente mayor al del grupo control (test de medias 56,8kcal, IC -76,6/190,2, p=0,1955; test de medianas 49,9kcal, IC -84,9/189,9, p=0,2142; test de signos 56,6%, IC 37,4/74,5, p=0,292). En los individuos en HD, el GER aumentó significativamente durante la sesión (test de medias 173kcal, IC -83,6/262,4, p=0,00022; test de medianas 170kcal, IC 85/255, p=0,00024; test de signos 83,33%, IC 65,3/94,3, p=0,00016). Al subdividir este grupo según presencia o ausencia de diabetes, se mantuvo el incremento del GER durante la diálisis. (test de medias 210kcal, IC 75,1/344,9, p 0,0044; test de medianas 212,5kcal, IC 65/340, p 0,0028; test de signos 85,71%, IC 42,1/99,6, p 0,06). Conclusiones: El GER de pacientes en HD no está incrementado con respecto a individuos sanos. En el paciente en HD crónica el GER aumenta durante el procedimiento dialítico en comparación al día que no asiste a diálisis.


Introducción: La carta de menú del restaurante, aparece como el elemento de comunicación más fuerte y a veces el único que se establece entre el restaurante y el consumidor. La tendencia creciente de comer fuera de casa convierte a los restaurantes en establecimientos cruciales para la promoción de un patrón alimentario saludable para toda la población. Una oferta alimentaria variada y equilibrada desde el punto de vista nutricional es el camino adecuado para mejorar la calidad de los menús, y con ello llevar mensajes nutricionales para mejorar la salud poblacional. Objetivos: Analizar el valor nutricional cualitativo de los menús y el diseño de la carta en los restaurantes de la ciudad de Mar del Plata en el año 2014. Materiales y método: La selección de restaurantes se llevó a cabo al azar por estratificación en zonas geográficas. Se realizó un análisis de valoración nutricional cualitativa de los menús con los datos recolectados. Simultáneamente, se analizó el diseño de las cartas de menús a través de una grilla de observación planteada específicamente para tal fin. Es un estudio descriptivo; no experimental y de tipo transversal. Resultados: Del menú se analizó un total de 258 entradas, 1186 platos principales, 137 guarniciones y 198 postres. La mayoría de las entradas y los platos principales ofrecidos están compuestos por proteínas animales, representado el 84% y el 70%, respectivamente. El promedio por restaurante es de 28 platos principales con papas fritas de guarnición. El diseño de la carta en su mayoría es sencillo y claro, sin elementos de comunicación visual llamativos. Conclusiones: Los menús analizados presentan un desequilibrio en su valor nutricional, con un exceso en proteína animal y poca oferta de platos con carbohidratos bajos.


Introducción: La perimenopausia se asocia con mayor probabilidad de padecer trastornos de la alimentación, destacándose la compulsión glucídica, que lleva a consumir fundamentalmente alimentos con alto contenido de carbohidratos entre comidas. Objetivos: evaluar aceptabilidad, preferencia y saciedad de colaciones dulces de baja densidad energética (DE) y alto aporte proteico en muestra de mujeres adultas perimenopáusicas. Materiales y método: A partir de receta estándar de merengues, se desarrollaron tres variantes con disminución de DE y sacarosa (Muestra A y C se reemplazó sacarosa por azúcar light y sucralosa en diferentes proporciones; Muestra B se disminuyó sacarosa y se agregó sucralosa). Se realizó ensayo de aceptabilidad y preferencia en 75 evaluadoras no entrenadas y prueba de saciedad a 27 evaluadoras no entrenadas, utilizando encuesta autoadministrada y escala hedónica de Likert de 9 puntos. Análisis estadístico: medidas de tendencia central, ANOVA, prueba de Friedman y Software "Statgraphics Centurion XVII" para pruebas de aceptabilidad. Resultados: Se desarrollaron merengues para las tres muestras de 1 g. cada uno, con disminución del 31% en la DE y 1,03 mg. de triptófano por unidad. La muestra B (se disminuyó la sacarosa al 88,7% y se agregó sucralosa en 11,3%), fue la de mayor preferencia y aceptabilidad por sus características sensoriales. Sobre esta muestra se aplicó el test de saciedad (libre demanda), obteniendo una media de ingesta de 10 unidades (Rango: 3-15). El 22,2% de las mujeres consumió 3 a 8 merengues; 51,8% 9 a 12 merengues y 25,9% más de 12 merengues. Se pudo observar que las mujeres estaban plenamente saciadas a los primeros 30 minutos, manifestando que a los 120 minutos tuvieron apetito. Conclusiones: La colación más aceptada y preferida fue la que mantuvo sacarosa y una proporción fue sustituida por edulcorante no calórico. El test de saciedad demostró que la colación seleccionada logró saciedad a corto plazo.


Introducción: Helicobacter pylori coloniza la mucosa gástrica y se asocia con el desarrollo de patologías gastrointestinales, pudiendo afectar la secreción de hormonas moduladoras del apetito. Objetivo: Evaluar la asociación entre la colonización gástrica por H. pylori, las concentraciones séricas de grelina y leptina y el índice de masa corporal (IMC) en pacientes con sintomatología digestiva. Materiales y método: Se llevó a cabo un estudio transversal que incluyó 163 pacientes dispépticos (18 - 70 años) derivados al Hospital de Gastroenterología "Dr. Carlos Bonorino Udaondo". Se realizó una encuesta sociodemográfica, recordatorio de 24 horas y se midió circunferencia de cintura (CC), peso y talla para el cálculo del IMC. La presencia de H. pylori se diagnosticó mediante 13C-Test del Aire Espirado (13C-UBT). Las concentraciones séricas de grelina y leptina se determinaron mediante enzimoinmunoensayo. Para el análisis estadístico se utilizaron los Tests de χ2, Mann-Whitney, correlación de Spearman y regresión lineal (SPSS19.0). Resultados: La prevalencia de la infección por H. pylori fue de 53,4% (IC95%;45,7-65,8%). La ingesta promedio de energía, carbohidratos, proteínas y lípidos no se asoció a la infección. Las prevalencias de sobrepeso/ obesidad y adiposidad central no difirieron significativamente entre H. pylori positivos y negativos (p=0.09 y p=0.87, respectivamente). La mediana de la concentración de grelina fue 306.5 pg/mL (RIC;230.0- 385.5) en H. pylori positivos y 358.3 pg/mL (RIC;253.8-547.8) en negativos. La infección se asoció con menores concentraciones séricas de grelina (p=0.016) aún ajustando por IMC y género (p=0.019), no habiéndose encontrado asociación entre los valores de leptina y la infección (p=0,76). Los niveles de grelina sérica se correlacionaron negativamente con el IMC (r=-0,25; p=0,0013), mientras que la correlación leptina-IMC fue positiva (r=0,56; p<0,00001) en la población total. Conclusiones: La colonización por H. pylori en pacientes con sintomatología digestiva se asoció con menores concentraciones séricas de grelina, enfatizando su rol en la regulación hormonal del apetito.


Introducción: La alimentación del recién nacido de pretérmino (RNPT) es un gran desafío. La administración óptima de nutrientes requiere de una infraestructura organizada y profesionales de distintas áreas que trabajen en forma conjunta. A partir de la necesidad de cumplir con estándares de calidad respecto del estado nutricional de pacientes neonatales, la Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales (UCIN) del Hospital Universitario Austral (HUA) sugirió la incorporación de un licenciado en nutrición para colaborar en diferentes aspectos del cuidado nutricional de los mismos. Objetivos: Promover la inserción del licenciado en nutrición como parte del equipo colaborador del cuidado nutricional del neonato. Evaluar posibles herramientas que el licenciado en nutrición pudiera aportar dentro de una UCIN. Materiales y método: Se trabajó con monitoreo continuo de pacientes ingresados en la UCIN del HUA de Pilar durante el periodo de diciembre 2012 hasta la actualidad. Se diseñó una planilla para cargar datos de los pacientes que ingresan a la Unidad obtenidos de la historia clínica informatizada de la institución (Pectra Digital Gate®). Resultados: A partir de los datos recolectados se obtuvo información sobre: días de recuperación del peso de nacimiento; número de días para cubrir requerimientos propuestos; número de días que recibe NPT; aumento de peso de los últimos 7 días; monitoreo de soporte nutricional indicado y recibido; porcentaje de leche materna vs fórmula recibida. Se colaboró en el diseño de planillas de fraccionamiento de leches, protocolos de inicio de alimentación del recién nacido de bajo peso al nacer y uso de fortificadores de la leche materna; se optimizó el registro de la alimentación enteral y parenteral recibida en la historia clínica; se realizó asesoramiento de productos y búsqueda bibliográfica para la incorporación de nuevas fórmulas dentro del Vademécum de la institución. Conclusión: La existencia de protocolos básicos actualizados, cálculo de los requerimientos energéticos en función de la situación clínica y el estado nutricional, monitoreo de la alimentación enteral y parenteral, cumplimento del objetivo calórico, son algunos indicadores que pueden utilizarse como herramienta para medir la calidad de la actividad asistencial. El asesoramiento y monitoreo del cuidado nutricional del neonato son parte de las funciones que los nutricionistas pueden cumplir dentro de dichas unidades. La inclusión en la enseñanza de grado y postgrado del cuidado nutricional de este grupo es de vital importancia dentro del aprendizaje continuo del licenciado en nutrición.


Introducción: El proyecto se enmarca en el Programa de Ciudadanía Porteña, programa de asistencia alimentaria implementado por el Ministerio de Desarrollo Social de la Ciudad de Buenos Aires, basado en transferencia directa de ingresos a familias en situación de vulnerabilidad Objetivos: Realizar educación alimentaria nutricional en 3 mensajes: lactancia materna, alimentación complementaria e hidratación a usuarios del programa en salas de espera de las sedes en que realizan trámites. Materiales y método: Se diseñaron y proyectaron 3 animaciones audiovisuales de corta duración, cada una con contenidos de cada mensaje principal de los objetivos. Se entregaron 3 folletos para complementar la información del video. Se realizaron 148 encuestas directas a los beneficiarios que asistieron a las sedes del programa para evaluar la incorporación de los mensajes. Resultados: Se analizaron las encuestas por mensaje. Lactancia materna: 98% vio el video; 81,6 % recordó el tema principal; el beneficio de defensas fue el mayor con el 33%; 28% leyó el folleto; 42% opinó es bueno amamantar hasta los 2 años y más. Alimentación complementaria: 87% vio el video; 47,5% respondió como tema principal: Primeras comidas del bebé; 24% y el 17% según sede leyeron el folleto; 60% respondió como tema del folleto: Qué alimentos dar a los bebés por edades; 31% opinó en comenzar la alimentación complementaria antes de los 6 meses. Hidratación y consumo: 76% vio el video; 86% respondió correctamente el tema principal del video; 44% respondió como principal beneficio del agua saca la sed; 6% tomó el folleto. Conclusiones: Los mensajes fueron comprendidos satisfactoriamente. La implementación de la animación es un recurso práctico y moderno que facilita la incorporación de los mensajes. Su proyección repetitiva permite llegar a mayor cantidad de beneficiarios, el material gráfico tuvo menor recepción.


Introducción: El pliego de condiciones para la concesión de un servicio de confitería establece la calidad requerida. Por tal motivo es esencial especificar adecuadamente las condiciones del servicio que se espera recibir para brindar satisfacción a los usuarios y partes interesadas.Objetivos: Analizar el proceso y el pliego de bases y condiciones para la concesión del servicio de confitería de la FCS de la UNSa. Proponer mejoras para orientar las actividades futuras en relación a la compra, selección, preparación distribución y control del servicio. Materiales y Método: Se realizó una encuesta de satisfacción para conocer la calidad percibida por los usuarios de la confitería de la FCS. Se analizaron el proceso y los subprocesos de concesión del servicio, el pliego de condiciones mediante el cual se rige la actual concesión. Se aplicó el diagrama de Espina de Pescado para determinar la causa raíz el problema. Resultados: Los clientes manifestaron insatisfacción en relación a la variedad de preparaciones y la omisión de alimentos saludables como vegetales, pescados, lácteos descremados, jugos de frutas, cereales integrales. Problema raíz: pliego de condiciones incompleto y poco detallado. Conclusiones: El plan de mejoras en relación al pliego de bases y condiciones requiere tener en cuenta aspectos tales como: calidad de la materia prima, plan de menú, tipo y cantidad de comidas, ingredientes, formas de preparación, características físico químicas de las preparaciones saludables, porción estándar, presentación y tipos de vajilla.


Introducción: La importancia del consumo de frutas es vital debido a sus propiedades nutritivas, por su aporte de vitaminas, minerales, fibra y agua. Las Guías Alimentarias para la Población Argentina (GAPA) recomiendan el consumo diario de 2 a 3 frutas. Objetivos: Estimar la prevalencia de consumo inadecuado de frutas y determinar la prevalencia de dicho consumo por exceso o déficit, en estudiantes. Estimar la prevalencia de los motivos por los cuales no se consumen frutas en estudiantes. Materiales y método: Diseño descriptivo, observacional y transversal. La muestra quedó conformada por 486 estudiantes universitarios y terciarios. Se midió el consumo de frutas a través de una encuesta diseñada para tal fin. El análisis estadístico se realizó mediante el paquete VCCstat V.Beta 2.0. Resultados: El 23,5% de la muestra pertenecía a alguna carrera de ciencias de la salud. El 74% (IC95% 69,9-77,9) de los estudiantes no cumplió con la recomendación diaria de las GAPA. De este porcentaje, un 96,4% (IC95% 93,8-98) no llegó a consumir al menos dos frutas diarias, mientras que solo un 3,6% (IC95% 1,9-6,1) de los encuestados superó dicha recomendación. Se encontró un 34,6% (IC95%30,3-38,9) de estudiantes con consumo nulo. Entre los motivos de este hallazgo, un 72% (IC95% 64,5-78,6) lo adjudicó a la "falta de hábito". Entre los motivos restantes se destacan "no me gusta" con el 10,7% (IC95%6,4-16,4) y "falta de practicidad" con el 9,5% (IC95%,5-15). Conclusión: La mayoría de los estudiantes consume menos cantidad de frutas que la recomendada. Debido a la falta de hábito, un gran porcentaje de estudiantes no incorpora frutas en su alimentación diaria.

2.
Biochem Biophys Res Commun ; 284(1): 77-82, 2001 Jun 01.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-11374873

RESUMO

The CED4/Apaf-1 family of proteins functions as critical regulators of apoptosis and NF-kappaB signaling pathways. A novel human member of this family, called CARD12, was identified that induces apoptosis when expressed in cells. CARD12 is most similar in structure to the CED4/Apaf-1 family member CARD4, and is comprised of an N-terminal caspase recruitment domain (CARD), a central nucleotide-binding site (NBS), and a C-terminal domain of leucine-rich repeats (LRR). The CARD domain of CARD12 interacts selectively with the CARD domain of ASC, a recently identified proapoptotic protein. In addition, CARD12 coprecipitates caspase-1, a caspase that participates in both apoptotic signaling and cytokine processing. CARD12 may assemble with proapoptotic CARD proteins to coordinate the activation of downstream apoptotic and inflammatory signaling pathways.


Assuntos
Apoptose , Proteínas de Caenorhabditis elegans , Proteínas de Ligação ao Cálcio/genética , Proteínas de Helminto/genética , Proteínas/genética , Animais , Especificidade de Anticorpos , Fator Apoptótico 1 Ativador de Proteases , Caspase 1/metabolismo , Linhagem Celular , Chlorocebus aethiops , DNA Complementar/genética , DNA Complementar/isolamento & purificação , Bases de Dados Factuais , Expressão Gênica , Genes Reporter , Humanos , Immunoblotting , Rim/citologia , Rim/metabolismo , Dados de Sequência Molecular , Família Multigênica , Especificidade de Órgãos , Estrutura Terciária de Proteína/fisiologia , Análise de Sequência de DNA , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Transdução de Sinais/fisiologia , Transfecção , Técnicas do Sistema de Duplo-Híbrido , Células Vero
3.
J Biol Chem ; 276(24): 21405-9, 2001 Jun 15.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-11259443

RESUMO

BCL10 belongs to the caspase recruitment domain (CARD) family of proteins that regulate apoptosis and NF-kappaB signaling pathways. Analysis of BCL10-deficient mice has revealed that BCL10 mediates NF-kappaB activation by antigen receptors in B and T cells. We recently identified a subclass of CARD proteins (CARD9, CARD11, and CARD14) that may function to connect BCL10 to multiple upstream signaling pathways. We report here that CARD10 is a novel BCL10 interactor that belongs to the membrane-associated guanylate kinase family, a class of proteins that function to organize signaling complexes at plasma membranes. When expressed in cells, CARD10 binds to BCL10 and signals the activation of NF-kappaB through its N-terminal effector CARD domain. We propose that CARD10 functions as a molecular scaffold for the assembly of a BCL10 signaling complex that activates NF-kappaB.


Assuntos
Proteínas Adaptadoras de Transdução de Sinal , NF-kappa B/metabolismo , Proteínas de Neoplasias/metabolismo , Núcleosídeo-Fosfato Quinase/genética , Núcleosídeo-Fosfato Quinase/metabolismo , Sequência de Aminoácidos , Animais , Proteínas Reguladoras de Apoptose , Proteína 10 de Linfoma CCL de Células B , Sítios de Ligação , Proteínas Adaptadoras de Sinalização CARD , Linhagem Celular , Membrana Celular/metabolismo , Genes Reporter , Guanilato Quinases , Humanos , Mamíferos , Dados de Sequência Molecular , Núcleosídeo-Fosfato Quinase/química , Especificidade de Órgãos , Alinhamento de Sequência , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Transdução de Sinais , Transcrição Gênica , Transfecção , Domínios de Homologia de src
4.
J Neurosci ; 20(10): 3563-70, 2000 May 15.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-10804197

RESUMO

The pore-forming alpha subunits of many ion channels are associated with auxiliary subunits that influence channel expression, targeting, and function. Several different auxiliary (beta) subunits for large conductance calcium-dependent potassium channels of the Slowpoke family have been reported, but none of these beta subunits is expressed extensively in the nervous system. We describe here the cloning and functional characterization of a novel Slowpoke beta4 auxiliary subunit in human and mouse, which exhibits only limited sequence homology with other beta subunits. This beta4 subunit coimmunoprecipitates with human and mouse Slowpoke. beta4 is expressed highly in human and monkey brain in a pattern that overlaps strikingly with Slowpoke alpha subunit, but in contrast to other Slowpoke beta subunits, it is expressed little (if at all) outside the nervous system. Also in contrast to other beta subunits, beta4 downregulates Slowpoke channel activity by shifting its activation range to more depolarized voltages and slowing its activation kinetics. beta4 may be important for the critical roles played by Slowpoke channels in the regulation of neuronal excitability and neurotransmitter release.


Assuntos
Regulação para Baixo/genética , Neurônios/metabolismo , Canais de Potássio Cálcio-Ativados , Canais de Potássio/genética , Canais de Potássio/metabolismo , Sequência de Aminoácidos , Animais , Linhagem Celular , Charibdotoxina/farmacologia , Clonagem Molecular , Eletrofisiologia , Epitopos/genética , Expressão Gênica/fisiologia , Haplorrinos , Humanos , Hibridização In Situ , Ativação do Canal Iônico/efeitos dos fármacos , Ativação do Canal Iônico/fisiologia , Rim/citologia , Cinética , Subunidades alfa do Canal de Potássio Ativado por Cálcio de Condutância Alta , Subunidades beta do Canal de Potássio Ativado por Cálcio de Condutância Alta , Canais de Potássio Ativados por Cálcio de Condutância Alta , Potenciais da Membrana/efeitos dos fármacos , Potenciais da Membrana/fisiologia , Camundongos , Dados de Sequência Molecular , Neurônios/química , Peptídeos/farmacologia , Canais de Potássio/química , Estrutura Quaternária de Proteína , RNA Mensageiro/análise , Análise de Sequência de DNA
5.
J Biol Chem ; 274(19): 12955-8, 1999 May 07.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-10224040

RESUMO

The nematode CED-4 protein and its human homolog Apaf-1 play a central role in apoptosis by functioning as direct activators of death-inducing caspases. A novel human CED-4/Apaf-1 family member called CARD4 was identified that has a domain structure strikingly similar to the cytoplasmic, receptor-like proteins that mediate disease resistance in plants. CARD4 interacted with the serine-threonine kinase RICK and potently induced NF-kappaB activity through TRAF-6 and NIK signaling molecules. In addition, coexpression of CARD4 augmented caspase-9-induced apoptosis. Thus, CARD4 coordinates downstream NF-kappaB and apoptotic signaling pathways and may be a component of the host innate immune response.


Assuntos
Proteínas Adaptadoras de Transdução de Sinal , Apoptose , Proteínas de Caenorhabditis elegans , Proteínas de Ligação ao Cálcio/metabolismo , Proteínas de Transporte/metabolismo , Proteínas de Helminto/metabolismo , NF-kappa B/metabolismo , Proteínas/metabolismo , Sequência de Aminoácidos , Fator Apoptótico 1 Ativador de Proteases , Sequência de Bases , Proteínas de Transporte/genética , DNA Complementar , Humanos , Dados de Sequência Molecular , Proteína Adaptadora de Sinalização NOD1 , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Transdução de Sinais
6.
Diabetes ; 46(6): 1081-6, 1997 Jun.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-9166684

RESUMO

Maturity-onset diabetes of the young 3 (MODY3) is a type of NIDDM caused by mutations in the transcription factor hepatocyte nuclear factor-1alpha (HNF-1alpha) located on chromosome 12q. We have identified four novel HNF-1alpha missense mutations in MODY3 families. In four additional and unrelated families, we observed an identical insertion mutation that had occurred in a polycytidine tract in exon 4. Among those families, one exhibited a de novo mutation at this location. We propose that instability of this sequence represents a general mutational mechanism in MODY3. We observed no HNF-1alpha mutations among 86 unrelated late-onset diabetic patients with relative insulin deficiency. Hence mutations in this gene appear to be most strongly associated with early-onset diabetes.


Assuntos
Cromossomos Humanos Par 12/genética , Proteínas de Ligação a DNA , Diabetes Mellitus Tipo 2/genética , Mutação/genética , Proteínas Nucleares/genética , Fatores de Transcrição/genética , Análise Mutacional de DNA , Primers do DNA/química , Família , Ligação Genética , Haplótipos , Fator 1 Nuclear de Hepatócito , Fator 1-alfa Nuclear de Hepatócito , Fator 1-beta Nuclear de Hepatócito , Humanos , Linhagem , Reação em Cadeia da Polimerase , Polimorfismo Conformacional de Fita Simples
7.
J Bacteriol ; 175(21): 7033-44, 1993 Nov.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-8226645

RESUMO

Rhizobium meliloti produces an acidic exopolysaccharide, termed succinoglycan or EPS I, that is important for invasion of the nodules that it elicits on its host, Medicago sativa. Succinoglycan is a high-molecular-weight polymer composed of repeating octasaccharide subunits. These subunits are synthesized on membrane-bound isoprenoid lipid carriers, beginning with a galactose residue followed by seven glucose residues, and modified by the addition of acetate, succinate, and pyruvate. Biochemical characterizations of lipid-linked succinoglycan biosynthetic intermediates from previously identified exo mutant strains have been carried out in our laboratory (T. L. Reuber and G. C. Walker, Cell 74:269-280, 1993) to determine where each mutation blocks the biosynthetic pathway. We have carried out a fine structure genetic analysis of a portion of the cluster of exo genes present on the second symbiotic megaplasmid of R. meliloti and have identified several new genes. In addition, the DNA sequence of 16 kb of the exo cluster was determined and the genetic map was correlated with the DNA sequence. In this paper we present the sequence of a family of glycosyl transferases required for the synthesis of succinoglycan and discuss their functions.


Assuntos
Sequência Conservada , Hexosiltransferases/metabolismo , Polissacarídeos Bacterianos/biossíntese , Sinorhizobium meliloti/enzimologia , Sequência de Aminoácidos , Sequência de Bases , Southern Blotting , Sequência de Carboidratos , DNA Bacteriano/química , DNA Bacteriano/metabolismo , Genes Bacterianos , Genótipo , Hexosiltransferases/biossíntese , Hexosiltransferases/genética , Dados de Sequência Molecular , Família Multigênica , Fases de Leitura Aberta , Plasmídeos , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Sinorhizobium meliloti/genética
8.
J Bacteriol ; 175(21): 7045-55, 1993 Nov.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-8226646

RESUMO

The major acidic exopolysaccharide of Rhizobium meliloti, termed succinoglycan, is required for nodule invasion and possibly nodule development. Succinoglycan is a polymer of octasaccharide subunits composed of one galactose residue, seven glucose residues, and acetyl, succinyl, and pyruvyl modifications, which is synthesized on an isoprenoid lipid carrier. A cluster of exo genes in R. meliloti are required for succinoglycan production, and the biosynthetic roles of their gene products have recently been determined (T.L. Reuber and G. C. Walker, Cell 74:269-280, 1993). Our sequencing of 16 kb of this cluster of exo genes and further genetic analysis of this region resulted in the discovery of several new exo genes and has allowed a correlation of the genetic map with the DNA sequence. In this paper we present the sequences of genes that are required for the addition of the succinyl and pyruvyl modifications to the lipid-linked intermediate and genes required for the polymerization of the octasaccharide subunits or the export of succinoglycan. In addition, on the basis of homologies to known proteins, we suggest that ExoN is a uridine diphosphoglucose pyrophosphorylase and that ExoK is a beta(1,3)-beta (1,4)-glucanase. We propose a model for succinoglycan biosynthesis and processing which assigns roles to the products of nineteen exo genes.


Assuntos
Genes Bacterianos , Família Multigênica , Polissacarídeos Bacterianos/biossíntese , Sinorhizobium meliloti/genética , Sequência de Aminoácidos , Sequência de Bases , Sequência de Carboidratos , Mapeamento Cromossômico , Sequência Conservada , Glicosídeo Hidrolases/genética , Dados de Sequência Molecular , Mutagênese Insercional , Fases de Leitura Aberta , Plasmídeos , Homologia de Sequência de Aminoácidos , Sinorhizobium meliloti/enzimologia , Sinorhizobium meliloti/metabolismo , UTP-Glucose-1-Fosfato Uridililtransferase/genética
9.
Cell ; 70(3): 491-500, 1992 Aug 07.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-1643660

RESUMO

Coliphage N4 virion-encapsidated, DNA-dependent RNA polymerase (vRNAP) is inactive on double-stranded N4 DNA; however, denatured promoter-containing templates are accurately transcribed. We report that all determinants of vRNAP promoter recognition exist in the template strand, indicating that this enzyme is a site-specific, single-stranded DNA-binding protein. We show that conserved sequences and the integrity of inverted repeats present at the promoters are essential for activity, suggesting the necessity for specific secondary structure. Evidence for such a structure is presented. We propose a model for in vivo utilization of vRNAP promoters in which template negative supercoiling yields single-strandedness at the promoter to reveal the determinants of vRNAP binding. This structure is stabilized by the binding of E. coli single-stranded DNA-binding protein to yield an "activated promoter."


Assuntos
DNA Viral/química , RNA Polimerases Dirigidas por DNA/metabolismo , Regiões Promotoras Genéticas , Vírion/enzimologia , Marcadores de Afinidade , Sequência de Bases , DNA Viral/metabolismo , RNA Polimerases Dirigidas por DNA/genética , Dados de Sequência Molecular , Mutagênese Sítio-Dirigida , Conformação de Ácido Nucleico , Sequências Repetitivas de Ácido Nucleico , Moldes Genéticos , Transcrição Gênica
10.
Biochem Soc Trans ; 19(3): 636-41, 1991 Aug.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-1783190

RESUMO

Genetic experiments have indicated that succinoglycan (EPS I), the acidic Calcofluor-binding exopolysaccharide, of the nitrogen-fixing bacterium Rhizobium meliloti strain Rm1021 is required for nodule invasion and possibly for later events in nodule development on alfalfa and other hosts. Fourteen exo loci on the second megaplasmid have been identified that are required for, or affect, the synthesis of EPS I. Mutations in certain of these loci completely abolish the production of EPS I and result in mutants that form empty Fix- nodules. We have identified two loci, exoR and exoS, that are involved in the regulation of EPS I synthesis in the free-living state. Certain exo mutations which completely abolish EPS I production are lethal in an exoR95 or exoS96 background. Histochemical analyses of the expression of exo genes during nodulation using exo::TnphoA fusions have indicated that the exo genes are expressed most strongly in the invasion zone. In addition, we have discovered that R. meliloti has a latent capacity to synthesize a second exopolysaccharide (EPS II) that can substitute for the role(s) of EPS I in nodulation of alfalfa but not of other hosts. Possible roles for exopolysaccharides in symbiosis are discussed.


Assuntos
Polissacarídeos Bacterianos/genética , Sinorhizobium meliloti/genética , Genes Bacterianos , Mutagênese , Polissacarídeos Bacterianos/biossíntese , Polissacarídeos Bacterianos/fisiologia , Sinorhizobium meliloti/fisiologia , Simbiose
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